Operar Equipo de Laboratorio y Materiales de Laboratorio
Practica #1 Medios de Cultivo
1._ Objetivo: debe ser realizado por el alumno
2._ Introducción
3._ Índice
4._ Indicaciones para desarrollas un medio de cultivo
1.-Se debe solicitar en el laboratorio de análisis clínicos un formato par anotar los materiales que se utilizaran en el laboratorio del medio de cultivo.
2.-Debe de tener su equipo de bioseguridad completo
3.-Vestir la mesa de laboratorio con papel blanco.
4.-una persona del grupo o dos debe de verificar que este activada del gas LP. Para ello se deben de conectar a los mecheros y abrir las válvulas que se encuentran por de bajo de las mesas de trabajo
5.- Una ves verificado el gas se habilita el equipo de esterilización “autoclave” al cual se le debe introducir agua destilada para llevar acabo la esterilización por calor húmedo
NOTA: ver técnica de esterilización en autoclave
Desarrollo de la práctica
Se debe pensar en la balanza granataria el contenido en gramos dependiendo de las cajas petri solicitadas siguiendo las indicaciones que contiene el medio de cultivo.
Se ocupa rehidratar el contenido del polvo para las 5.7 cajas y este se mezclar en el contenido de agua destilada que se requiera par las cajas solicitadas.
El polvo se mezcla junto con el agua en el vaso de precipitado que anteriormente fue pesado en el vidrio de reloj para mezclar se utiliza una varilla de cristal como agitador cuidando que no quede suficiente grumos en las paredes del vaso de precipitado.
Para facilitar esta actividad puede utilizar el matraz e elenmeyer de forma directa y al terminar la mezcla se deja en reposo como la marca las indicaciones del bote del medio de cultivo a trabajar.
Se debe de llevas los tiempos de trabajo y acomodarlos en forma como bitácora de actividades la cual inicia con este medio de cultivo y termina con las observaciones microscópicas del mismo en la practica 8.
Una ves reposado el medio de cultivo se expone al fuego del mechero con un ligero muñequeo hasta dejar que se presente la ebullición, una ves presentada se toma el tiempo de un minuto de ebullición cuidando que este producto al hervir no se derramen ya que puede ocasionar quemadura hasta de segundo grado.
NOTA:
Si el medio de cultivo se tira por negligencia tendrán cada uno de los integrantes 2 puntos menos en su calificación.
Una ves que ya dio la ebullición y el tiempo adecuado del minuto se deja enfriar y reposar para poderlo tapar (tamponear) con torundas de algodón muy cuidadosamente sin que estas se baya al interior del vaso se ponen se pone poquito masquen tape para asegurarse que este bien cerrado se etiqueta con el numero de la mesa el nombre del medio de cultivo y la fecha ya terminado este proceso se introduce al autoclave para iniciar la esterilización del medio.
* Técnicas de esterificación
Ya esterilizado el medio de cultivo se retira del autoclave se deja enfriar poniéndolo en el campo de esterilización de la mesa el cual esta a base de los mecheros y en el centro de las cosas (siempre), se deja enfriar u se prepara los materiales para el vaseado es vaso de precipitado de 50 ml y cajas de petri que se vallan utilizar para realizar el vaseado en las cajas petri se toma el vaso de precipitado se esteriliza previamente la boquilla del mismo el mechero se pasa cuidadosamente y una ves que este listo se le vierte el liquido del medio de cultivo que se depositara en cada caja petri.
Ya estando las cajas petri trabasadas (llenas) se dejan semi tapadas y no en si totalidad para evitar que se forme vapor de agua en si interior
Se taparan las cajas petri una ves que el alumno verifique que el piso del medio de cultivo sea solidificado ya cerradas se estivan (enciman) se etiquetan con los datos del medio de cultivo, nombre, mesa, fecha, de elaboración y se entregaran al encargado del laboratorio en forma invertida para su refrigeración.
Si el producto elaborado se contamina en un promedio de 24, 48 72 horas quier decir que no se tomaron las medidas adecuadas de esterilización por lo que se deberá realizar un nuevo medio lógico aplicando la sanción requerida al laboratorio.
Practica # 2
Técnicas de esterilización
Esterilización por húmedo (autoclave)
El alumno deberá realizar el proceso de esterilización del producto que ocupara la práctica de siembras para ello requiere tener los conocimientos de la técnica de esterilización en autoclave ya anteriormente dada.
MATERIALES
Autoclave
Agua destilada
Corriente eléctrica
Guantes para alta temperatura
DESARROLLO
(Aplicar técnica de esterilización)
NOTA:
BITACORA:
El alumno debe realizar su propia bitácora de actividades la cual registrara nombre de las practicas, tiempo utilizado, fecha de trabajo, observaciones, en esta bitácora debe registrar al final un recuadro que indique el espacio para firmar de aceptado o rechazado; Esta debe ser cuadriculada utilizando la creatividad del alumno.
Practica # 3
Siembras en medio de cultivo
El alumno debe realizar una siembra en medios de cultivo de forma estriada, variada y aplicando el nombre de cada una de ellas de las que anteriormente se dieron en el salón de clases.
Materiales
5 a 7 cajas petri de medio de cultivo anteriormente habilitadas
Asa bacteriológica
Baso de precipitado con 25 ml de agua destilada
2 mecheros de unce
Papel para mesa de laboratorio tubo tónico
Masquen tape
Torundas de algodón con secas (3 a 4)
2 torundas de algodón con alcohol
Muestra para siembras
a)saliva
b)muestra interdental
c)orina
d)agua preparada (jamaica, piña)
e)verduras de las que preparan para ser tortas
f)muestre de sangre
Técnicas de extracción sanguínea
Se utilizan los siguientes materiales
Jeringa de 5 ml para extraer 2.5 ml
torundas alcoholizadas
torniquete
Se realiza asepsia y antisepsia se plegue del brazo utilizando una torunda con alcohol.
los movimientos de limpieza son arriba hacia abajo ( del brazo hacia el antebrazo) porque contaminamos el área.
Unas ves esterilizadas iniciamos la técnica de Beno función y para ello debemos manejar nuestra jeringa hipodérmica desechable.
Se verifica el aseguramiento de la aguja en la jeringa dándole un pequeño giro para que no se mueva y posteriormente jalando el embolo hacia atrás de las mismas y a su ves lo regresaremos hasta el fondo de la jeringa quedando esta lista para su uso.
Una ves lista nuestra jeringa y ya limpia la zona del pliegue se aplica el torniquete en la parte media del brazo para hacer presión y obtener una vasodilatación del conducto sanguíneo, en el cual se introducirán la aguja de la jeringa que es pinzo cortante y ya estando dentro del baso sanguíneo extraemos la sangre en cantidad dentro del baso sanguíneo extraemos la sangre en cantidad de volumen de 2.5 ml la que depositaremos en el tubo contaron rojo sin anticoagulante.
No se retira el tapón del tubo se introduce la aguja e el teniendo un baseado rápido en su interior se retira la jeringa con todo y aguja y una ves tomado el tiempo desde su extracción hasta el llenado del tubo registraremos lo que llamaremos tiempo de coagulación, que es de 1 a 5 minutos hasta 8 minutos, el tiempo real esta entre uno y dos minutos.
Una vez coagulada la sangre en el tubo de ensaye, retiramos el tapón y centrifugados a 1500 revoluciones por minuto durante 5 minutos, teniendo como resultado la precipitación de paquete sanguíneo por centrifugación a lo que le daremos el nombre de separación de paquete y plasma.
Una vez separado el paquete en el tubo se ensaye vacío trasvasamos el plasma sanguíneo, el cual es color amarillo paja o pálido y que utilizaremos para realizar la siembre.
NOTA
Esta técnica se utilizara nuevamente en la prueba no. 8(aglutinación de pruebas febriles)
Se siembra el liquido plasmático en medio de cultivo utilizando la técnica bombadilla de cristal denominado siembre por dispersión.
Practica # 4
Observación microscópica de colonias de microorganismos (bacterias) que se desarrollan en medio de cultivo.
El alumno debe realizar la observación macroscópica en el medio de cultivo sembrado.
Materiales
5 a 7 cajas petri con medio de cultivo
Herramientas de medición pie de rey o vernier
Registrar la observación, medición y conteo de las colonias bacterianas, esto se debe a verificar en un campo de esterilización que se realiza con los dos mecheros, donde verificamos de olor, color, dimensión de la colonia.
Practica # 5
Elaboración de un frotis
Frotis:
Es un proceso científico que consiste en el extendido de una gota de sangre en la superficie de un porta objetos o de un cubreobjetos, con el fin de analizarla posteriormente.
Es mas adecuado emplear sangre que aun no ha estado en contacto co el anticoagulante, pues este podría alterar los resultados (algunos anticoagulantes tienen a deformar las células de la sangre)
-Se realiza en un porta objetos un frotis con materia de las cajas petri.
Se toma con el asa bacteriológica previamente esterilizada en la flama del mechero una gota de agua del baso precipitado se introduce a la caja petri y se toma una pequeña muestra del producto que desarrollamos en ella.
Se deposita en el porta objetos dando móv. De izquierda a derecha sobre el
cristal para realizar el barrido el cual debe quedar delgado y fino, si queda grueso se vuelve a esterilizar, se toma una gota de agua, se vuelve a realizar el barrido en el cristal hasta que quede delgado y fino, hasta lograrlo.
Una ves realizada el frotis se va a fijar a fuego directo, pasando el portaobjetos por encima de la flama del mechero sin dejarlo fijamente sobre ella.
Ya fijado el frotis queda listo para el proceso de tinción.
MATERIALES
portaobjetos limpio
asa bacteriológica
baso de precipitado con 50 ml con 25 ml de agua destilada
2 mecheros de bunsen
GAS LP
Papel secante
Torundas de algodón secas
3 torundas con alcohol
Practica # 6
Tensión de Gram.
Se realiza el proceso de tincion de Gram en el portaobjetos anteriormente provisto con material bacteriológico ya fijado al que le damos el nombre de frotis.
Se utiliza la tecnica de Gram la cual esta provista con dos tinturas un degradante y un yodo lugol, previamente utilizado os tiempos de marca la tecnica de Gram y para ello debemos investigar esta tecnica.
Al termino de esta tincion que dura 3 a 5 minutos debemos verificar que no se queme con las torundas que no sea altamente degradada para que podamos observarla, si todo esto sucediera debemos realizar nuevamente las actividades y a premira del tiempo solo nos da para dos nuevas acciones, si en al tercera oportunidad sigue el problema se realiza punto malo.
Sin laminilla ya preparada y lista (practica # 7 observación macroscópica) se monta en la platina del microscopio se asegura con las pinzas de la platina y se observa a 100x donde encontramos bacterias en forma esférica y en forma de bastón y que ambas las podemos encontrar desde un hasta 4 piazas separado con puntas, en cadena en agrupaciones de hasta tercer plano.
Material de la práctica # 7
porta objetos debidamente teñido para observar material bacteriológico
aceite de inversión
microscopio compuesto o protónico
corriente eléctrica
Nota
Todos los trabajos de investigación se deben presentar en forma ordenada para firmarlos y subirlos al blog, iniciando a partir del lunes y por la tarde en la noche subirlas al blog.
Nota
No se aceptara un solo trabajo si el borrador no lleva gráficos con colores
Investigar:
Las bacterias en forma de esfera llamadas cocos.
Las bacterias en forma de bastón llamadas bacilos
Las bacterias en forma de espiral llamadas espirilos o piroquetas
Bacterias llamadas cocos:
Las bacterias pueden clasificarse de varios modos, como por ejemplo según su forma. Las bacterias que tienen forma esférica reciben el nombre de cocos. Los cocos que pueden causar infecciones en los humanos son los estafilococos, los estreptococos, los neumococos y los meningococos.
-Infecciones estafilocócicas
Las infecciones estafilocócicas son las causadas por los estafilococos, que son unas bacterias grampositivas muy frecuentes.
Aunque normalmente están presentes en la nariz y en la piel del 20 al 30 por ciento de los adultos sanos (y menos frecuentemente en la boca, las glándulas mamarias y los aparatos genitourinario, intestinal y las vías respiratorias altas), los estafilococos no suelen ser perjudiciales. Sin embargo, la rotura de la piel u otra lesión pueden permitir que las bacterias atraviesen las defensas del organismo y causen una infección.
Los individuos proclives a las infecciones estafilo-cócicas son los recién nacidos, las mujeres en período de lactancia, las personas con enfermedades crónicas (especialmente afecciones pulmonares, diabetes y cáncer), las que presentan afecciones cutáneas e incisiones quirúrgicas y aquellas cuyos sistemas inmunológicos están inhibidos por el uso de corticosteroides, radioterapia, fármacos inmunodepresores o medicaciones anticancerosas.
-Síntomas
Los estafilococos pueden infectar cualquier parte del organismo y los síntomas dependen de la localización de la infección. Ésta puede ser leve o llegar a poner en peligro la vida. Por lo general, las infecciones estafilocócicas producen cavidades llenas de pus, como los abscesos y los forúnculos (forúnculos y carbuncos). Los estafilococos pueden circular por la sangre y formar abscesos en los órganos internos, como los pulmones, así como infecciones de los huesos (osteomielitis) y del revestimiento interior del corazón y sus válvulas (endocarditis).
Los estafilococos tienden a infectar la piel. Los abscesos estafilocócicos de la piel aparecen como abultamientos calientes llenos de pus, localizados bajo la superficie cutánea. Por lo general se rompen como lo haría un grano de gran tamaño y el pus se esparce sobre la piel, donde se puede producir más infección si no se limpia de inmediato.
Bacterias llamadas bacilos
Los bacilos son bacterias que tienen forma de bastón, cuando se observan al microscopio.
Los bacilos se suelen dividir en:
Bacilos Gram positivos: fijan el violeta de genciana (tinción de Gram) en la pared celular porque carecen de capa de lipopolisacárido.
Bacilos Gram negativos: no fijan el violeta de genciana porque poseen la capa de lipopolisacárido (peptidoglicano).
Aunque muchos bacilos son patógenos para el ser humano, algunos no hacen daño, pues son los encargados de producir algunos productos lácteos como el yogurt (lactobacilos).
Bacterias llamadas espirilos o piroquetas
Los espirilos son bacterias flageladas de forma helicoidal o de espiral. Se desplazan en medios viscosos avanzando en tornillo. Su diámetro es muy pequeño, lo que hace que puedan atravesar las mucosas; por ejemplo Treponema pallidum que produce la sífilis en el hombre. Son más sensibles a las condiciones ambientales que otras bacterias, por ello cuando son patógenas se transmiten por contacto directo (vía sexual) o mediante vectores, normalmente artrópodos hematófagos
